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本(ben)質(zhi)上是(shi)填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強；反相色譜柱填料極性弱，洗脫順序由強到弱。以下是詳細說明：
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反向色譜
反(fan)向色(se)譜用的(de)填料(liao)常是(shi)以硅膠(jiao)為基(ji)質，表面鍵合(he)有極(ji)性相對較(jiao)(jiao)弱官能團的(de)鍵合(he)相。反(fan)向色(se)譜所使用的(de)流動相極(ji)性較(jiao)(jiao)強，通常為水、緩沖(chong)(chong)液與甲醇、乙腈等的(de)混合(he)物。樣品流出色(se)譜柱的(de)順序(xu)是(shi)極(ji)性較(jiao)(jiao)強的(de)組分先被(bei)沖(chong)(chong)洗出，而極(ji)性弱的(de)組分會在色(se)譜柱上有更強的(de)保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
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